Les interactions entre polysaccharides et lipides forment aujourd’hui un vaste domaine d’étude, présentant notamment un intérêt particulier pour les industries alimentaires et pharmaceutiques. Nous savons que l’amylose, un polysaccharide composé de résidus glucose branchés en α1-4 essentiellement linéaire, peut encapsuler de petites molécules hydrophobes formant ce qu’on appelle un polymorphe V. L’étude de ce type de complexes pourrait permettre de développer de nouvelles voies de formulations de substances bioactives ou de nouveaux adjuvants de vaccins. Ces interactions pourraient aussi être présentes dans d’autres systèmes biologiques, tels que dans la capsule de Mycobacterium tuberculosis. En effet, cette couche externe enveloppant le bacille contient majoritairement un polysaccharide ramifié analogue à l’amylose appelé α-glucane mais aussi de multiples lipides connus comme étant des facteurs de virulence de cette mycobactérie, tels que les dimycocérosates de phthiocérol ou les dimycolates de tréhalose. La mise en évidence et l’analyse de ce type d’interaction pourrait permettre de comprendre l’organisation de cette capsule et d’en savoir plus sur ses fonctions biologiques. Ce manuscrit présente une étude mêlant méthodes théoriques et expérimentales de caractérisation des interactions au sein de complexes d’amylose en présence de lipides « classiques » ou mycobactériens ainsi que de systèmes comprenant des polysaccharides ramifiés.
La première partie de ce manuscrit présente deux études purement théoriques portant sur des complexes d’amylose en présence d’acide palmitique et de doubles hélices d’amylose appelées polymorphe B. En utilisant une méthodologie couplant dynamique moléculaire (MD) et calculs de paramètres RMN par DFT, nous avons pu caractériser le nombre minimum de résidus glucose nécessaires pour former de manière stable le polymorphe V autour de l’acide palmitique. Nous avons pu aussi démontrer l’impact de la longueur du polymère sur le calcul de paramètres RMN et qu’il était crucial d’introduire le caractère dynamique de ces polymorphes afin d’obtenir des résultats en accord avec l’expérience. Concernant le polymorphe B, nous avons pu montrer qu’il était nécessaire de prendre en compte les conditions périodiques du système afin de pouvoir différencier deux types de résidu au sein de la double hélice, comme cela est observé expérimentalement sur des échantillons cristallins.
A notre connaissance, aucun polymorphe V n’a été caractérisé en présence de lipides présentant plus d’une chaine lipidique. La deuxième partie de ce manuscrit décrit donc la formation de complexes d’amylose en présence de lipides classiques et mycobactériens présentant 1, 2 ou 4 chaines lipidiques et leur analyse par RMN du solide. Nous avons élaboré un modèle décrivant les différents équilibres mis en jeu lors de la complexation et avons pu démontrer que la structure primaire des lipides en était un facteur principal. La présence d’une insaturation au milieu de la chaine lipidique semble notamment prévenir la formation de précipités lipidiques, et ainsi favoriser la formation de polymorphes V. Les simulations de dynamique moléculaire couplées à des calculs de paramètres RMN par DFT montrent que malgré la diversité de structures de complexation obtenues, ces dernières génèrent toutes un signal RMN reprenant les caractéristiques d’un polymorphe V et en accord avec les données expérimentales.
Enfin, la troisième et dernière partie de ce manuscrit décrit les travaux théoriques et expérimentaux réalisés sur des complexes polysaccharides branchés - lipides. Nous avons pu démontrer que le protocole expérimental utilisé pour complexer l’amylose n’était pas adapté à l’étude de polysaccharides branchés. De plus, les calculs réalisés semblent décrire un effet de structuration locale de ces polysaccharides en présence de lipides, ce qui pourrait expliquer la structuration de la capsule à la surface du bacille Mycobacterium tuberculosis. |
Polysaccharide-lipid interactions now form a vast domain of study, of particular interest to the pharmaceutical and food industries. We already know that amylose, an essentially linear polysaccharide composed of α[1-4]-linked glucose moieties, can form helices around small hydrophobic molecules and lipidic chains. These helical structures are called V polymorphs and their study may allow the development of new ways to deliver bioactive compounds, or of new vaccine adjuvants. This type of interaction might also be found in other biological systems, such as in the capsule of Mycobacterium tuberculosis. Indeed, this external layer covering the bacillus is composed mostly of a large branched polysaccharide analogous to amylose, called α-glucan, but it also contains numerous lipids, such as phtiocerol dimycocerosates or trehalose dimycolates, known to be virulence factors of the mycobacterium. Demonstration of the existence of such interactions and their study may lead to a better understanding of the capsule and its biological functions. This manuscript describes a study combining theoretical and experimental methods to characterize the interactions amongst amylose complexes formed in the presence of classical and mycobacterial lipids and in systems composed of branched polysaccharides.
The first part of this work describes two purely theoretical studies on amylose complexed with palmitic acid and on amylose double helices called B polymorphs. Using molecular dynamics (MD) simulations and calculations of Nuclear Magnetic Resonance (NMR) parameters at the Density Functional Theory (DFT) level, we were able to define the minimum number of glucose residues needed to former a stable V polymorph around a palmitic acid molecule. We could also show that the number of residues has a direct impact on the calculation of NMR parameters and that it is crucial to consider the dynamic behavior of these polymers to obtain results that fit well to experimental data. Regarding the B polymorph, we showed that it is essential/necessary to consider the periodic conditions of the system to be able to characterize two different residue positions, as has been observed experimentally.
To the best of our knowledge, no V polymorph has been characterized in the presence of lipids composed of several lipidic chains. The second part of this manuscript describes several such complexes, formed in the presence of classical and mycobacterial lipids composed of 1, 2 or 4 lipidic chains, and their analysis by solid-state NMR. We elaborated a model describing the different equilibria implicated in the complexation process and could demonstrate that the primary structure of the lipids was one of the key factors. The presence of one site of unsaturation in the middle of the lipidic chain seems to prevent the formation of lipidic precipitates and so favors the formation of V polymorphs. MD simulations, coupled with the calculation of NMR parameters using DFT, show that, despite the diversity of structures obtained, all complexes generate an NMR signal characteristic of a V polymorph, in agreement with experimental observations.
Finally, the third and last part of this thesis describes theoretical and experimental work performed on complexes formed by branched polysaccharides and lipids. We could show that the experimental protocol used to form amylose complexes was not well suited to the study of branched polysaccharides. Moreover, the calculations describe a local structuration of the polysaccharide, caused by the lipids. This effect could explain the structuration of the capsule on the surface of the bacillus. |