Afin de réduire notre empreinte carbone sur l’environnement, il est urgent de développer des procédés industriels utilisant une source de carbone renouvelable comme la biomasse lignocellulosique. Cette biomasse est composée d’un enchevêtrement complexe de cellulose, d’hémicelluloses, de pectines et de lignines. Cette matrice permet aux parois cellulaires végétales de résister aux attaques biologiques et chimiques mais représente un frein au développement d’une bioéconomie responsable. Dans la Nature, des enzymes multimodulaires produites par certains microorganismes peuvent la déconstruire. Toutefois, ces enzymes sont majoritairement étudiées sur des substrats artificiels ou purifiés. Dans cette thèse, nous proposons d’étudier des enzymes multimodulaires sur des substrats broyés puis des coupes de paille de blé brutes. Les enzymes multimodulaires sont préparées à façon en utilisant la propriété d’association covalente des protéines Jo et In. Nous avons ainsi associé la xylanase NpXyn11A de N. patriciarum avec deux modules non catalytiques : le CBM3a de C. thermocellum ou le CBM2b1 C. fimi ciblant la cellulose ou les xylanes respectivement. Les propriétés biochimiques de ces protéines chimériques ont été déterminées et comparées aux modules sauvages. L’activité enzymatique des protéines chimériques a ensuite été étudiée sur des substrats artificiels et solubles, jusqu’à des substrats insolubles comme le son et la paille de blé, notamment par immunocytochimie. Ce travail a mis en évidence l’importance de la relation enzymes/substrats pour une caractérisation in muro d’activité enzymatique et une meilleure compréhension de la déconstruction de la biomasse végétale. |
In order to reduce our carbon footprint on the environment, it is more than urgent to develop new industrial process using a renewable carbon source such as lignocellulosic biomass. Plant cell walls consist of a complex network of cellulose, hemicelluloses, pectins and lignins that cross-link with each other mainly via non-covalent bonds. It is thus hardly surprising that plant biomass is rather recalcitrant to chemical or biological degradation. In the present era marked by the desire to build a green bioeconomy, this recalcitrance remains a key point. In Nature, the plant-based organic carbon contained within plant cell walls is mainly recycled by the action of cellulolytic microorganisms, producing a large set of multimodular enzymes. However, these enzymes are mainly characterized on artificial or purified substrates. In this thesis, we proposed to study multimodular enzymes on raw substrates such as wheat straw sections. The studied multimodular enzymes were associated thanks to the use of two small proteins Jo and In. Thus, we associated the xylanase NpXyn11A from N. patriciarum with two non-catalytic modules: CBM3a from C. thermocellum or CBM2b1 from C. fimi targeting cellulose or xylans respectively. Biochemical properties of these chimeric proteins and wild-type modules have been determined and compared. The enzymatic activity of chimeric proteins has been studied on artificial and soluble substrates and compared to the activity on insoluble substrates, mainly by immunocytochemistry. This work highlighted the importance of the relationship between enzymes and substrates and its key role to better understanding the biomass deconstruction in muro. |