Au cours de leur métabolisme, les céramides, produits de novo au niveau du réticulum endoplasmique, sont transportés vers l’appareil de Golgi pour être convertis en sphingomyéline. Le mode principal de ce transport implique la protéine cytosolique CERT (CERamide Transfer).
La surexpression de CERT, responsable d’un abaissement du taux intracellulaire en céramide pro-apoptotique, a été associée au phénomène de résistance aux agents chimiothérapeutiques de plusieurs lignées de cellules tumorales. L’inhibition de CERT permet de resensibiliser ces lignées cellulaires aux agents anti-cancéreux. Cependant, une seule famille d’inhibiteurs de CERT est connue à ce jour : les HPAs.
A l’extrémité C-terminale de la protéine, le domaine START contient le site de liaison du céramide nécessaire à l’activité de transport de CERT. A partir de structures cristallographiques, une méthode d’identification de nouveaux ligands, combinant des outils in silico et in vitro, a été développée. La jaspine B, des analogues HPAs et des iminosucres ont été mis à jour en tant qu’antagonistes potentiels de CERT par cette méthode. Certains des composés identifiés ont été synthétisés et évalués in vitro. Des sondes fluorescentes de la jaspine B ont été conçues afin d’approfondir la compréhension de son mécanisme d’inhibition. En parallèle, un test de liaison in vitro HTR-FRET a été développé, permettant le criblage haut-débit de la Chimiothèque Nationale Essentielle.
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During its metabolism, ceramides, produced de novo in the endoplasmic reticulum, are transported to the Golgi complex to be converted into sphingomyelin. The main way of this transport involves the cytosolic CERT protein (Ceramide Transfer).
Overexpression of CERT, responsible for a diminution of intracellular level of proapoptotic ceramide, is associated with the phenomenon of resistance to chemotherapeutic agents in several tumor cell lines. The CERT inhibition allows to resensitize these cell lines to anticancer drugs. Yet, only a single family of inhibitors is known to date: HPAs.
Located at the C-terminal region of the protein, the START domain contains the binding site of ceramide necessary for the transport activity of CERT. Based on crystallographic structures, a method for the identification of new CERT ligands, combining in silico and in vitro tools, was developed. Jaspine B, HPAs analogs and iminosugars were identified as potential antagonists using this method. Some of these compounds were synthesized and evaluated in vitro. Fluorescent probes of jaspine B were designed for a better understanding of it mechanism of action. In parallel, an in vitro HTR-FRET binding assay was developed, allowing the high-throughput screening of the National Essential Compound Library.
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